超級生物素快速標記試劑盒 主營

品牌： Frdbio

規格： 0.5ml/4ml/15ml

貨號： ARL0021SK

主要組分:

活性超級生物素     2mg/4mg/6mg

超 濾 管        1支

標記緩沖液       30mL/60mL/90mL

標記物保存液      2mL/4ml/10ml

助溶劑(DMSO)     1mL/1.5mL/2mL

選購之前客戶需要根據待標記物的分子量大小和標記量選擇最適宜的型號

產品介紹:

本生物素標記試劑盒提供了超級生物素快速標記所需全部試劑,用于含有伯氨基(NH2-)的蛋白/抗體/多肽或者其他大分子的標記。本生物素通過其反應原理如下:

產品特點:

l 延長了生物素的連接臂,更少地減少空間位阻,也可以適合于細胞的表面標記;

l   使用方法簡單,無需額外準備試劑;

l   節約時間,整個過程僅需 90min;

l   通過離心脫鹽和去除游離的生物素,無需透析或者凝膠過濾;

超級生物素標記使用量的計算:每個反應中生物素試劑的使用量取決于待標記蛋白質的量和濃度。例如,通過我們實驗數據分析表明,標記2mg/ml 的抗體(IgG ,150KD),使用生物素和抗體的分子比為 20:1 能達到*效果;其他蛋白的標記可以根據實際情況,參照此比例類推。

計算公式如下:

其中:V(μL)為生物素的體積;

      V1(mL)為待標記物(蛋白/抗體/其他含有伯胺-NH2的大分子);

      C1(mg/mL)為待標記物的濃度;

      R 為生物素與待標記物的分子比例;           

      M為待標記物的分子量(道爾頓,Dalton,Da)

      C(mM)為生物素的濃度

計算示例:我們將生物素配置成10mM的濃度,用來標記1mL 的2mg/ml 的抗體(IgG ,150KD),準備加入的生物素與抗體的比例為20:1,那么帶入公式計算

實驗前準備:

1.仔細閱讀使用說明書。

2.按照生物素標記使用量的計算的公式計算所需要的生物素的量。

3.提前 20min 從冰箱中取出試劑盒,使試劑盒各組分平衡至室溫。

4.用助溶劑DMSO將活性超級生物素配制成10mM(2mg超級生物素加DMSO 440ul) 

 特別提示:

A.       溶解的活性生物素*一次性使用完,如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱內,一月內可以使用,但是標記效率會降低;

B.       生物素助溶劑使用完之后需要立即密封保存,防止吸潮。

操作步驟:(本操作步驟按照 1mg抗體的量進行標記)

1.取1mg 待標記抗體于超濾管中,并加入不超過超濾管*體積的標記緩沖液,12,000g 離心 10min;可以重復此步驟多次;*一次超濾完成,可以加入適量標記緩沖液調整抗體的濃度到2mg/mL左右;

請注意:

A.超濾管的*體積和*截留分子量,本實例超濾管的*體積為 0.5mL;

B.如果待標記抗體濃度低時,可先超濾離心濃縮;

C.如果待標記物含有游離的氨基(Tris,氨基酸或者其他干擾物,需要用標記緩沖液反復超濾確保其去除干凈)

2. 加入13.3μL溶解的活性超級生物素至上述超濾管中,并輕輕吹打混勻。放入 37℃恒溫箱中避光溫育 30min。

3. 12,000 x g 離心 10min。

4. 加入適量標記緩沖液至上述超濾管中,并輕輕吹打混勻,12,000g 離心 10min, 重復此步驟多次。

5. 收集超濾管中的溶液(即生物素標記的抗體),加入等體積保存液,-20℃保存。

注意事項:

1.本試劑盒適用于所有含有伯氨基(NH2-)的大分子物質的標記,(蛋白,抗體,以及其他含有伯氨基(NH2-)的化合物分子),具體標記比例根據待標記物中氨基的數量確定;

2.本試劑盒中的生物素助溶劑為DMSO ,使用完畢后要密封干燥保存;

3.本試劑盒配備了標記物保存液,實驗人員也可以根據被標記物的特點不同,選擇更適合的保存液。

4.本試劑盒未開封前的有效期為18個月,請在有效期內使用。

5.本系列試劑盒提供的為超濾管分為不同的截留分子量和不同的*容積,客戶需要根據自己要標記的物質的分子量大小和標記量選擇適合的型號。

*本試劑僅供實驗室研究使用